www.cell-sorter.de
Zellpräparation für die Sortierung mit dem MoFlo:
Für die Zellsortierung sind Einzelzellsuspensionen notwendig.
Verwende die Zellen so frisch wie möglich.
Die optimale Zellkonzentration für eine schnelle Sortierung beträgt ca. 30 - 40 Millionen Zellen pro ml, das Mindestvolumen ist aber 1 ml.
Wenn mit adhärenten (klebrigen) Zellen gearbeitet wird, Ca2+/Mg2+ -freies Medium verwenden!
Um Verklumpungen zu vermeiden, 0,5 % oder noch weniger FCS oder BSA in die Probe geben!
Weiter, um Verklumpungen zu vermeiden, kaltes Medium für die Probe verwenden!
Man kann auch 0,1 mM EDTA oder EGTA zur Zellsuspension geben, um Verklumpungen zu vermeiden.
oder käufliches Zelldissotiationsmedium verwenden, z. B. Cell Dissociation Solution (C-5789) von Sigma!
Vermeide tote Zellen, Zelltrümmer und andere unnötige Ereignisse, um die Sortierung zu beschleunigen.
Zur Entfernung toter Zellen kann als Reinigungssäule eine mit Baumwolle gestopfte Pasteurpipette dienen.
Erythrozyten bitte lysieren !
Wenn Zellkerntrümmer (DNA) vorhanden sind, 100µg/ml DNAse hinzugeben!
Die meisten Fluoreszenzfarbstoffe sind lichtempfindlich. Die Proben sollten vor hellem Licht geschützt werden!
Um die Klumpen zu entfernen, sieben wir unmittelbar vor dem Sortieren alle Proben normalerweise mit einem 53 µm weiten Nylonnetz ab.
Damit sich die sortierten Zellen wohlfühlen, geeignetes Medium oder Serum zum Auffangen mitbringen bzw. das Medium in die Multiwellplatten vorlegen ! Ein Tröpfchen mit einer Zelle hat ca. 1,4 nl.
