Methoden
Adaptives Immunsystem
Neue Protokolle hinzugefügt! (09.06.11)
- Isolierung von PBMC
Diese Protokolle beschreiben die Isolierung, das Einfrieren und Auftauen von peripheren mononukleären Blutzellen für funktionelle Versuche. Protokoll: Isolierung mittels Ficoll: Download pdf-Format, Protokoll: PBMC Isolierung, Einfrieren und Auftauen Download pdf-Format - Analytische Mehrfarben-Durchflusszytometrie (FACS)
Mit Hilfe der analytischen Mehrfarben-Durchflusszytometrie (FACS) ist es möglich, kleinste spezifische Zellpopulationen im Blut von Patienten zu identifizieren. - Intrazelluläre Durchflusszytometrie-Färbungen
Durch die intrazellulären Färbungen wird es möglich, sehr spezialisierte Zellen in der Durchflusszytometrie-Analyse nachzuweisen, bzw. deren Aktivierungszustand oder Zytokinproduktion. Download pdf-format, - Flow Zytometer Schule
Wir helfen Ihnen bei den Grundlagen der Multiparameter Durchflusszytometrieanalyse. - MHC-Multimer-Analysen
MHC-Multimer-Analysen ermöglichen es während des Therapieverlaufs einzelne hochspezialisierte T-Zell-Populationen im Blut zu detektieren. Protokoll für fixierte Zellen: Download pdf-format, Protokoll für unfixierte Zellen: Download pdf-format. - Zytokin-"Capture"-Assay
Der Zytokin-"Capture"-Assay erlaubt die Identifikation und Anreicherung Tumor- bzw. Pathogen-reaktiver T-Zellen (CD4+ und CD8+) über ihre Effektorfunktion ohne das Wissen um Antigen oder MHC. - ELISPOT-Assay
Der Elispot-Assay ist einer der sensitivsten Assays, um Antigen-spezifische T-Zellen auf Einzelzellebene anhand der Sezernierung von Effektormolekülen (Zytokine, Granzym B oder Perforin) zu quantifizieren. Im Allgemeinen benötigt er keine in vitro Stimulation oder exogene Zytokine und funktioniert mit frischen sowie eingefrorenen Zellen. Der ELISPOT wird oft für eine erste Evaluierung von Impfstoffen und für die Charakterisierung von T-Zellepitopen eingesetzt. Download pdf-format - Multiplex Bead Array
Diese Assays erlauben die gleichzeitige, quantitative Analyse einer Vielzahl von Zytokinen, Chemokinen oder Phosphoproteinen in kleinsten Probenmengen des Patienten (Serum, Plasma oder Zellkulturüberstände nach in vitro Stimulation). Die BioPlex/Luminex Technologie und das BD CBA FlexSet Sytem unter Verwendung eines Durchflußzytometers seienhier beispielhaft genannt. - ELISA
Der ELISA (enzym-linked immunosorbent assay) ist für die Messung von Impfstoff-induzierten Antikörpern im Plasma oder Serum der Patienten geeignet. Die meisten Zytokine lassen sich mittlerweile sensitiver mittels anderer Technologien bestimmen. - Immunhistologie
Die Anwendung der immunhistologischen Färbung erlaubt die Detektion von einzelnen Immunzellen, die in das maligne veränderte oder infizierte Gewebe einwandern. Sie ist besonders geeignet, um z.B. die in die Impfstelle eingewanderten Immunzellen zu quantifizieren. Die Technologie ist jedoch semiquantiativ und Doppel- bzw. Mehrfachfärbungen sind schwierig zu etablieren. Download pdf-format - T-Zell-Rezeptor Analysen
Durch Analyse des T-Zell-Rezeptor-Repertoires ist es möglich, spezifische T-Zell-Klone der Patienten zu analysieren. Protokoll für fixierte Zellen: Download pdf-format, Protokoll für unfixierte Zellen: Download pdf-format
Angeborenes Immunsystem
- Quantifizierung von Monozyten Populationen
Dieses Protokoll beschreibt die absolute Quantifizierung von Monozyten-Subpopulationen im peripheren humanen Blut.
Download-pdf-format - Aufarbeitung von Sputumproben
Dieses Protokoll beschreibt die Schritte, die zur Aufbereitung von Sputumproben notwendig sind.
Download pdf-format - Identifizierung und Charakterisierung von regulatorischen T-Zellen
Dieses Protokoll beschreibt die Charakterisierung und Identifizierung von regulatorischen T-Zellen mittels multifarben Durchflusszytometrie.
Download pdf-format - Charakterisierung von NK-Zellen
Dieses Protokoll beschreibt die Subtypisierung verschiedener NK-Zellpopulationen mittels multifarben Durchflusszytometrie.
Download pdf-format - Proliferationsassay
Dieses Protokoll beschreibt die notwendigen Schritte für die Färbung von Zellen mit einem zytoplasmatischen Farbstoff, so dass die Proliferation dieser Zellen im Durchflusszytometer untersucht werden kann.
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Professionelles Immunmonitoring umfasst die parallele Anwendung der unterschiedlichsten Technologien, die nur zusammen die Bestimmung der Frequenz, des Phänotyps, die Funktion und die Homingkapazität Vakzine-induzierter Lymphozyten in der Zirkulation oder im Zielgewebe ermöglichen. Nur eine Kombination von mehreren der o. g. Methoden wird auch zu einem validen Set von Surrogatmarkern für erfolgreiche immuntherapeutische Strategien in der Zukunft führen.
Einige interessante Referenzen:
Britten, C.M., Janetzki, S., van der Burg, S. H., Gouttefangeas, C., Hoos, A. Toward the harmonization of immune monitoring in clinical trials: Quo vadis? Cancer Immunol. Immunother. 57; 285-288 (2008)
Britten, C. M., Gouttefangeas, C., Welters, M. J. P., Pawelec, G., Koch, S., Ottensmeier, C., Mander, A., Walter, S., Paschen, A., Müller-Berghaus, J., Haas, I., Mackensen, A., Køllgaard, T., thor Straten, P., Schmitt, M., Giannopoulos, K., Maier, R., Veelken, H., Bertinetti, C., Konur, A., Huber, C., Stevanović, S., Wölfel, T., van der Burg, S. H. The CIMT-monitoring panel: a two-step approach to harmonize the enumeration of antigen-specific CD8+ T lymphocytes by structural and functional assays. Cancer Immunol. Immunother. 57; 289-302 (2008)
Janetzki, S., Panageas, K. S., Ben-Porat, L., Boyer, J., Britten, C. M., Clay, T. M., Kalos, M., Maecker, H. T., Romero, P., Yuan, J., Kast, M., Hoos, A. Results and harmonization guidelines from two large-scale international Elispot proficiency panels conducted by the Cancer Vaccine Consortium (CVC/SVI). Cancer Immunol. Immunother. 57: 303-315 (2008)
Keilholz, U., Martus, P., Scheibenbogen, C. Immune monitoring of T cell responses in Cancer. Clin. Cancer Res. 12; 2346-2352 (2006)
Knutson, K. L., dela Rosa, C., Disis, M. L. Laboratory analysis of T cell immunity. Frontiers in Biosciences 11; 1932-1944 (2006).
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